GB/T 20365-2006 硫酸軟骨素和鹽酸氨基葡萄糖含量的測定 液相色譜法

更新時間:2024-01-26      點擊次數:90

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中華人民共和國國家標準

GB/T 20365-2006

硫酸軟骨素和鹽酸氨基葡萄糖含量的測定 液相色譜法

Determination method for chondroitin sulfate and glucosamine hydrochloride-Liquid chromatography method

 

前言

  本標準的附錄A和附錄B為資料性附錄。

  本標準由中華人民共和國山東出入境檢驗檢疫局提出。

  本標準由中華人民共和國山東出入境檢驗檢疫局負責起草。

  本標準主要起草人:牛增元、王巖、孫忠松、袁玲玲、王境堂、紀雷。

 

1范圍

  本標準規定了用液相色譜法測定硫酸軟骨素和鹽酸氨基葡萄糖含量的方法。

  本標準適用于從牛、豬和鯊魚等動物軟骨組織中提取的硫酸軟骨素及其中的鹽酸氨基葡萄糖的測定。

 

2規范性引用文件

  下列標準文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。

  GB/T 6682分析實驗室用水規格和試驗方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 36961987

 

3原理

  用乙腈將硫酸軟骨素樣品分散均勻,以水溶解,經液相色譜分離后,在波長192 nm測定,外標法定量。

 

4試劑和材料

4.1水:GB/T 6682規定的一級水。

4.2乙腈:液相色譜級。

4.3戊燒磺酸鈉:純度≥99.5%。

4.4硫酸軟骨素A標準品:純度約70% ,其余為硫酸軟骨素C,結構式參見附錄A。

4.5硫酸軟骨素 B標準品:純度約90%,其余為硫酸軟骨素AC,結構式參見附錄A。

4.6硫酸軟骨素C標準品:純度約90% ,其余為硫酸軟骨素A,結構式參見附錄A。

4.7鹽酸氨基葡萄糖:純度≥99.0%。

4.8標準溶液:稱取25.0mg105℃干燥4h的硫酸軟骨素標準品A(或B,或C)和25.0mg鹽酸氨基葡萄糖于燒杯中,加入5.0 mL乙腈,振蕩使其分散均勻,再加入水,用超聲波使其溶解,轉移至50mL容量瓶中,用水定容至刻度,硫酸軟骨素濃度約為0.5mg/mL,鹽酸氨基葡萄糖濃度約為0.5 mg/mL。

4.9戊烷磺酸鈉溶液:稱取0.87g戊烷磺酸鈉溶液用500mL水溶解,該溶液的濃度為10mmol/L。

 

5儀器和設備

5.1超聲波發生器。

5.2分析天平:感量為0.1 mg。

5.3高效液相色譜儀:配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。

5.4濾膜:聚四氟乙烯膜(PTFE),0.2μm。

 

6測定步驟

6.1 樣品溶液的制備

  當樣品是顆粒狀態時,需要先將其在研缽中研細成粉末。

  將粉末狀樣品在105℃下干燥4 h。稱取25.0mg樣品于50 mL燒杯中,加入5.0 mL乙腈,振蕩使其分散均勻,再加入水,用超聲波使其溶解,轉移至50 mL容量瓶中,用水定容至刻度,搖勻。用液相色譜儀測定前,樣品溶液用0.2μm濾膜過濾。

6.2色譜條件

a)流動相:乙腈+戊烷磺酸鈉溶液(10+90);

b)色譜柱:C18(用極性小分子封尾),粒徑5 μm,柱長250 mm,內徑4.6 mm;

注:可用NUCLEODUR C18 Pyramid色譜柱,或其他相當者。

c)流速:0.8 mL/min;

d)檢測波長:192 nm;

e)進樣體積:10 μL。

6.3色譜測定

  分別將標準溶液、樣品溶液注入液相色譜儀進行測定,記錄色譜峰面積。從牛軟骨組織中提取的硫酸軟骨素樣品使用硫酸軟骨素A標準品,從豬軟骨組織中提取的硫酸軟骨素樣品使用硫酸軟骨素B標準品,從鯊魚軟骨組織中提取的硫酸軟骨素樣品使用硫酸軟骨素C標準品。標準溶液的典型色譜圖參見附錄B。

 

7結果的計算

被測物的含量按式(1)計算:

                                              image.png

式中:

Wi——樣品中被測物的百分含量,%;

Ai——樣品溶液中被測物的色譜峰面積;

mis——標準溶液中被測物標準品的質量,單位為毫克(mg);

Ais——標準溶液中被測物標準品的色譜峰面積;

m——樣品的質量,單位為毫克(mg)。

 

8精密度

  在重復性條件下,硫酸軟骨素獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不大于這兩個測定值的算術平均值的0.5%;鹽酸氨基葡萄糖獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不大于這兩個測定值的算術平均值的1.5%。


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