GB 31613.5-2022 食品安全國家標準 雞可食性組織中抗球蟲藥物殘留量的測定

更新時間:2024-01-29      點擊次數:91

GB 31613.5-2022 食品安全國家標準 雞可食性組織中抗球蟲藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法.jpg

中華人民共和國國家標準

GB 31613.5-2022

食品安全國家標準 雞可食性組織中抗球蟲藥物殘留量的測定

液相色譜-串聯質譜法

National food safety standard-

Determination of coccidiostats residues in chicken edible tissues by

liquid chromatography-tandem mass spectrometric method

 

1 范圍

  本文件規定了雞可食組織中常山酮、氯苯胍、鹽霉素、莫能菌素、甲基鹽霉素、馬度米星銨和拉沙洛西7種抗球蟲藥物殘留量檢測的制樣和液相色譜-串聯質譜測定方法。

  本文件適用于雞肌肉、肝臟和皮脂(皮+脂)中常山酮、氯苯胍、鹽霉素、莫能菌素、甲基鹽霉素、馬度米星銨和拉沙洛西7種抗球蟲藥物殘留量的檢測。

 

2規范性引用文件

  下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

  GB/T 6682分析實驗室用水規格和試驗方法

 

3術語和定義

  本文件沒有需要界定的術語和定義。

 

4原理

  試樣中殘留的抗球蟲藥物經胰蛋白酶酶解,乙酸乙酯提取,固相萃取柱凈化,液相色譜-串聯質譜法檢測,基質匹配外標法定量。

 

5試劑與材料

 除另有規定外,所有試劑均為分析純,水為符合GB/T 6682規定的一級水。

5.1 試劑

5.1.1甲醇(CH3OH):色譜純。

5.1.2 乙腈(CH3CN):色譜純。

5.1.3 乙酸(CH3COOH):色譜純。

5.1.4甲酸(HCOOH):色譜純。

5.1.5乙酸乙酯(CH3CH2OOCCH3):色譜純。

5.1.6胰蛋白酶:來源于牛胰腺,≥10000 U/mg。

5.1.7碳酸鈉(Na2CO3)。

5.2溶液配制

5.2.1 10%碳酸鈉溶液:取碳酸鈉20 g,加水適量使溶解并稀釋至200 mL,混勻。

5.2.2 1%乙酸溶液:取乙酸1 mL,用水稀釋至100 mL,混勻。

5.2.3 20%甲醇溶液:取甲醇20 mL,用水稀釋至100 mL,混勻。

5.2.4 洗脫液:取甲醇100 mL,加乙酸乙酯200 mL,混勻。

5.2.5 復溶液:取甲醇50 mL,加水50 mL、甲酸0.1 mL,混勻。

5.3 標準品

  常山酮、氨苯胍、鹽霉素、莫能菌素、甲基鹽霉素、馬度米星銨、拉沙洛西含量≥95%。具體見附錄A。

5.4 標準溶液制備

5.4.1 標準儲備液(1 mg/mL):取常山酮、氯苯胍、鹽霉素、莫能菌素、甲基鹽霉素、馬度米星銨、 拉沙洛西標準品適量(相當于各有效成分10 mg),精密稱定,分別加甲醇適量使溶解并稀釋定容于10 mL容量瓶,配制成濃度均為1 mg/mL 的標準儲備液。-18℃以下避光保存,有效期6個月。

5.4.2混合標準工作液(10μg/ mL :分別精密量取標準儲備液各0.1 mL,于10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,配制成濃度為10 μg/mL的混合標準工作液。-18℃以下避光保存,有效期6個月。

5.4.3混合標準工作液(1 μg/mL):精密量取10 μg/mL的混合標準工作液1 mL,于10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,配制成濃度為1 μg/mL的混合標準工作液。-18℃以下避光保存,有效期3個月。

5.4.4混合標準工作液(0.1μg/ mL :精密量取1 pug/mL的混合標準工作液1 mL,于10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,配制成濃度為0.1pug/mL的混合標準工作液。-18℃以下避光保存,有效期1個月。

5.5 材料

5.5.1 三鍵鍵合C18固相萃取柱:500 mg/6 mL,或相當者。

5.5.2尼龍微孔濾膜:0.22 μm。

 

6儀器和設備

6.1 液相色譜-串聯質譜儀:配電噴霧離子源。

6.2 分析天平:感量0.01 g0.00001 g。

6.3高速冷凍離心機:10000 r/min。

6.4組織勻漿機。

6.5渦旋混合器。

6.6固相萃取裝置。

6.7氮吹儀。

6.8 水浴搖床。

6.9 pH計。

 

7試樣的制備與保存;

7.1試樣的制備

取適量新鮮或解凍的空白或供試組織,絞碎并均質。

a)取均質后的供試樣品,作為供試試樣;

b)取均質后的空白樣品,作為空白試樣;.

c)取均質后的空白樣品,添加適宜濃度的標準工作液,作為空白添加試樣。

7.2 試樣的保存

  -18℃以下保存。

 

8測定步驟

8.1 提取

  稱取試料1 g(準確至±0.01 g),加胰蛋白酶25 mg、水5 mL,渦旋1 min,用10%碳酸鈉溶液調pH7.5,40℃水浴過夜酶解。取出放至室溫,加10%碳酸鈉溶液1 mL,渦旋1 min。加乙酸乙酯9 mL,渦旋5min,于4℃、10000 r/min離心10 min,轉移上清液,殘渣重復提取1次。合并2次提取液,用乙酸乙酯稀釋至20.0 mL,混勻。取提取液2.0 mL35℃水浴氮氣吹干,加乙腈1 mL渦旋1 min, 加水10 mL,混勻,備用。

8.2 凈化

  固相萃取柱依次用甲醇5 mL.1%乙酸溶液5 mL活化,取備用液全部過柱,控制流速為每2 s~3 s 1滴。用1%乙酸溶液3 mL20%甲醇溶液3 mL淋洗,用洗脫液10 mL洗脫。收集洗脫液,35℃水浴氮氣吹干,加復溶液1.0 mL渦旋1 min,于-4℃、10 000 r/min離心10 min,取上清液,過濾膜后供液相色譜-串聯質譜測定。

8.3基質匹配標準曲線的制備

  6份空白樣品經提取和凈化后,加入適量的標準工作液,35℃水浴氮氣吹干,加復溶液1.0 mL渦旋1 min,配制成濃度為0.5 μg/L、1 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、25 μg/L50 μg/L的基質匹配標準溶液,于-4℃、10000r/min離心10min,取上清液,過濾膜后供液相色譜-串聯質譜測定。以測得特征離子峰面積為縱坐標、對應的標準溶液濃度為橫坐標,繪制標準曲線,求回歸方程和相關系數。

8.4 測定

8.4.1液相色譜參考條件

色譜柱:C1850 mm×2.1 mm,1.7 μm,或相當者;

流動相:A0.1%甲酸水溶液,B0.1%甲酸甲醇溶液;

梯度洗脫:梯度洗脫程序見表1;

流速:0.3 mL/ min;

柱溫:30℃;

進樣量:10 μL。

                                              image.png

8.4.2 質譜參考條件

a)離子源:電噴霧(ESI)離子源;

b)掃描方式:正離子掃描;

c)檢測方式:多反應監測;

d)電離電壓:4.0 kV;

e)離子源溫度:100℃;

f)霧化溫度:350℃;

g)錐孔氣流速:30 L/h;

h)霧化氣流速:600 L/h;

i)待測藥物的定性離子對、定量離子對、錐孔電壓和碰撞能量的參考值見表2。

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8.4.3 測定法

8.4.3. 1定性測定

  在同樣測試條件下,試料溶液中抗球蟲藥物的保留時間與基質匹配標準工作液中抗球蟲藥物的保留時間之比,偏差在±2.5%以內,且檢測到的相對離子豐度,應當與濃度相當的基質匹配標準溶液相對離子豐度一致。其允許偏差應符合表3的要求。

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8.4.3.2 定量測定.

  取試料溶液和基質匹配標準工作液,作單點或多點校準,按外標法定量?;|匹配標準工作液及試料溶液中目標物的響應值均應在儀器檢測的線性范圍內。在上述色譜質譜條件下,標準溶液特征離子質量色譜圖見附錄B。

8.5空白試驗

  取空白試料,除不加藥物外,采用完全相同的測定步驟進行平行操作。

 

9結果計算和表述

試樣中抗球蟲藥物的殘留量按標準曲線或公式(1)計算。

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式中:

X——試樣中抗球蟲藥物殘留量的數值,單位為微克每千克(μg/kg);

A——試樣中抗球蟲藥物的峰面積;

CS——基質匹配標準溶液中抗球蟲藥物濃度的數值,單位為微克每升(μg/L);

V1——提取液體積的數值,單位為毫升(mL);

V2——分取提取液體積的數值,單位為毫升(mL);

V——復溶液體積的數值,單位為毫升(mL);

A——基質匹配標準溶液中抗球蟲藥物的峰面積;

m——試樣質量的數值,單位為克(g)。

 

10 方法靈敏度、準確度和精密度

10.1 靈敏度

  本方法的檢測限為5μg/kg,定量限為10μg/kg。

10.2準確度

  本方法在10 μg/kg~100 μg/kg添加濃度水平上的回收率為60% ~120%。


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