GB 31658.19-2022 食品安全國家標準 動物性食品中阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、利多卡因、普魯卡因殘留量的測定

更新時間:2024-01-30      點擊次數:75

GB 31658.19-2022 食品安全國家標準 動物性食品中阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、<a class=

中華人民共和國國家標準

GB 31658.19-2022

食品安全國家標準

動物性食品中阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、利多卡因、普魯卡因殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法

National food safety standard-

Determination of atropine, scopolamine, anisodamine,

lidocaine, procaine residues in animal derived food- -Liquid

chromatography-tandem mass spectrometric method

 

1 范圍

  本文件規定了動物性食品中阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、利多卡因、普魯卡因殘留量檢測的制樣和液相色譜-串聯質譜檢測方法。

  本文件適用于豬、牛、羊的肌肉、肝臟、腎臟和脂肪中阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、利多卡因、普魯卡因單個或多個藥物殘留量的測定。

 

2規范性引用文件

  下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對應的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

  GB/T 6682分析實驗室用水規格和試驗方法

 

3術語和定義

  本文件沒有需要界定的術語和定義。

 

4原理

  試樣中殘留的待測物經磷酸鹽緩沖液提取,PEP-2固相萃取柱凈化,液相色譜串聯質譜測定,外標法定量。

 

5試劑和材料

  除另有規定外,所有試劑均為分析純,水為符合GB/T 6682規定的一級水。

5.1試劑

5.1.1甲醇(CH3OH):色譜純。

5.1.2 乙腈(CH3CN):色譜純。

5.1.3甲酸(HCOOH):色譜純。

5.1.4磷酸二氫鉀(KH2PO4)。

5.1.5磷酸氫二鉀(K2HPO4·H2O)。

5.1.6磷酸(H3PO4)。

5.2溶液配制

5.2.1 0.1 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液:取磷酸二氫鉀13.6 g,加水900 mL使溶解,用磷酸調節pH4. 0±0.05,用水稀釋至1 000 mL,混勻。

5.2.2 0.2 mol/L磷酸氫二鉀溶液:取磷酸氫二鉀22.8 g,加水溶解并稀釋至500 mL,混勻。

5.2.3 5%甲醇溶液:取甲醇5 mL,加水稀釋至100 mL,混勻。

5.2.4 30%乙腈溶液:取乙腈30 mL,加水稀釋至100 mL,混勻。

5.2.5 0. 1%甲酸溶液:取甲酸0.5 mL,加水稀釋至500 mL,混勻。

5.3 標準品

  阿托品(Atropine,C17H23NO3,CAS號:51-55-8)、東莨菪堿(Scopolamine,C17H21NO4,CAS號:51-34-3)、山茛菪堿(Anisodamine,C17H24NO4,CAS號:55869-99-3)、利多卡因(Lidocaine C14H22N2 O,CAS號:137-58-6)、普魯卡因(Procaine,C13H20N2O2 ,CAS號:59-46-1),含量均≥99%。標準品也可為相應的鹽。

5.4標準溶液配制

5.4.1標準儲備液:取阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿、利多卡因、普魯卡因標準品各適量(相當于各活性成分約10mg),精密稱定,加甲醇適量使溶解并稀釋定容至10mL容量瓶,配制成濃度為1mg/mL的標準儲備液。- 18℃避光保存,有效期6個月。

5.4.2混合標準中間液:準確量取標準儲備液各1mL,于100mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,配制成濃度為10 μg/mL的混合標準工作液。-18℃避光保存,有效期1個月。

5.4.3 系列標準工作液:準確量取混合標準中間液適量,用30%乙腈溶液稀釋, 配制成濃度分別為1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL100 ng/mL的系列標準溶液?,F配現用。

5.5材料

5.5.1 PEP-2固相萃取柱:填料為官能化聚苯乙烯/二乙烯苯,60 mg/3 mL,或相當者。

5.5.2微孔尼龍濾膜0.22μm。

 

6儀器和設備

6.1液相色譜-串聯質譜儀:配電噴霧離子源。

6.2 分析天平:感量0. 01g0.00001 g。

6.3 渦旋混合器。

6.4渦旋振蕩器。

6.5高速冷凍離心機:轉速可達10 000 r/min。

6.6固相萃取裝置。

6.7組織勻漿機。

6.8 pH計。

 

7試料的制備與保存

7.1試料的制備

  取適量新鮮或解凍的空白或供試組織,絞碎,并使均質。

a)取均質后的供試樣品,作為供試試料;

b)取均質后的空白樣 品,作為空白試料;

c)取均質后的空白樣品,添加適宜濃度的標準溶液,作為空白添加試料。

7.2試料的保存

  -18℃以下保存。

 

8測定步驟

8.1提取

  取試料2 g(準確至±0.05 g)于50 mL離心管中,準確加入0.1 mol/L 磷酸二氫鉀緩沖液20 mL(脂肪樣品在60℃水浴加熱10 min),渦旋1 min,振蕩10 min,4℃下10000 r/min離心10 min。準確移取10 mL上清液至另一離心管中,加入0.2 mol/L磷酸氫二鉀溶液5 mL,混勻后備用。若溶液渾濁,10000 r/min離心10 min,取上清液備用。

8.2 凈化

  PEP-2固相萃取柱分別用甲醇3 mL、水3 mL活化,移取全部備用液,過柱,用水3 mL、5%甲醇溶液3mL淋洗,抽干,準確移取30%乙腈溶液2mL洗脫,抽干,收集洗脫液,過微孔尼龍濾膜,供液相色譜-串聯質譜測定。

8.3基質匹配標準曲線的制備

  準確移取系列標準工作液各100 μL,用經8.1~8.2步驟處理后的空白試樣洗脫液稀釋至1 mL,配制成濃度為0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL.5 ng/mL10 ng/mL的系列基質匹配標準溶液,過微孔尼龍濾膜后,供液相色譜-串聯質譜測定。以各藥物特征離子質量色譜峰面積為縱坐標,基質匹配標準溶液濃度為橫坐標,繪制基質匹配標準曲線,求回歸方程和相關系數。

8.4 測定

8.4. 1液相色譜參考條件

a)色譜柱:C18色譜柱100 mm×2.1 mm,1.7μm,或相當者;

b)柱溫:35℃;

c)進樣量:2μL;

d)流速:0.3 mL/min;

e)流動相:A0. 1%甲酸溶液;B為甲醇。梯度洗脫程序見表1。

                                              image.png

8.4.2

質譜參考條件

a)離子源:電噴霧離子源;

b)掃描方式:正離子掃描;

c)檢測方式:多反應監測;

d)噴霧電壓:1.0 kV;

e)鞘氣:30 Arb;

f)輔助氣:5 Arb;

g)離子遷移管溫度:325℃;

h)霧化溫度:300℃;

i)待測藥物的保留時間、定性離子對、定量離子對、錐孔電壓和碰撞能量的參考值見表2。

image.png

image.png

8.4.3 測定法

8.4.3.1定性測定

  在同樣測試條件下,試料溶液中待測物藥物峰的保留時間與基質匹配標準溶液相應峰的保留時間相對偏差在±2.5%以內,且檢測到的相對離子豐度,應當與濃度相當的基質匹配標準溶液相對離子豐度一致。其允許偏差應符合表3要求。

image.png

8.4.3.2定量測定

  取試料溶液和相應的基質匹配標準溶液,作單點或多點校準,按外標法以色譜峰面積定量?;|匹配標準工作液及試樣溶液中待測物響應值均應在儀器檢測的線性范圍內。在上述色譜-質譜條件下,基質匹配標準溶液的特征離子質量色譜圖見附錄A。

8.5空白試驗

  取空白試料,除不加藥物外,采用相同的測定步驟進行測定。

 

9結果計算和表述

試樣中待測物殘留量按標準曲線或公式(1)計算:

image.png

式中:

X——試樣中待測物殘留量的數值,單位為微克每千克(μg/kg);

Cs——基質標準溶液中待測物濃度的數值,單位為納克每毫升(ng/mL);

A——試樣溶液中待測物的峰面積;

As——基質標準溶液中待測物的峰面積;

V——洗脫液體積的數值,單位為毫升(mL);

V1——凈化用提取液體積的數值,單位為毫升(mL);

V2——試樣提取液總體積的數值,單位為毫升(mL);

m——試樣質量的數值,單位為克(g)。

 

10檢測方法靈敏度、準確度和精密度

10.1靈敏度

  本方法在豬、牛、羊的肌肉和脂肪組織中的檢測限為0.2μg/kg,定量限為0.5μg/kg;在豬、牛、羊的腎臟和肝臟組織中的檢測限為0.5μg/kg,定量限為1.0 μg/kg。

10.2準確度

  本方法在豬、牛、羊的肌肉和脂肪組織0.5μg/kg~5μg/kg添加濃度水平上的回收率為60%~120%;在豬、牛、羊的腎臟和肝臟組織1.0μg/kg~10μg/kg添加濃度水平上的回收率為60%~120%。

10.3精密度

  本方法批內相對標準偏差≤15%,批間相對標準偏差≤15%。


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